激光共聚焦显微镜的操作步骤

　　激光共聚焦荧光显微镜是一种目前先进的分子细胞生物学的分析仪器，利用计算机，激光及图像处理技术获得生物样品的三维数据。主要是用于观察活细胞结构以及特定分子，离子的生物学变化，定量分析，以及实时的定量测定等。

　　激光共聚焦显微镜的操作步骤：

　　1、根据荧光探针的激发与发射波长，选择合适的激光，激光功率，光谱滤光片和发射滤光片。

　　2、确定扫描的方法：点，线，面，3D扫描。

　　3、确定扫描的密度（分辨率）：分辨率越高，扫描的速度就越慢，图像的信噪比也越好，但可能会出现光漂白。

　　4、选择其物镜的倍数及电子放大倍率：确定完这个条件之后，在选择扫描的范围，物镜的透光率与数值孔径（NA）的四次方成正比，并且物镜放大倍数的平方。所以，反比例，应该尽量选择具有高数值孔径的物镜。

　　5、根据样品的制备质量，选择合适的针孔尺寸，调节激光管电压，光电倍增管功率，降噪等，达到最佳状态。这些参数的选择或者设置十分紧密，都要全面考虑。

　　6、确定光线的切割范围，也就是扫描样品的厚度，起始位置以及结束位置。

　　7、给出了由光切割的层数和拍摄时的累积平均次数。

　　8、获取图像并保存。

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